广州辉骏生物慢病毒实验技术服务

一、慢病毒服务简介
慢病毒（Lentivirus）载体是以人类*缺陷I型病毒(HIV-1)为基础发展起来的基因载体。它是一种逆转录病毒，能使外源基因整合入宿主的基因组稳定、长期表达，但却比一般的逆转录病毒具有更高的滴度和更广的宿主范围。携带外源基因的慢病毒载体与包装载体(表达病毒包装所需辅助蛋白)一同转染包装细胞，即可进行病毒的包装；经收集和浓缩的慢病毒液可以直接用于感染宿主细胞或活体动物模型。
辉骏生物使用的慢病毒包装系统是4质粒包装系统，包括1个慢病毒表达载体和3个慢病毒包装载体(分别表达病毒包装必需的蛋白Gag/Pol、Rev和VSV-G)，包装细胞为293T细胞。
辉骏生物提供包含多种荧光基因(如GFP或RFP等)、多种抗性筛选标签和多种启动子的慢病毒载体，可充分满足客户不同实验设计的要求。
 
二、慢病毒表达系统的特点
1> 能将外源基因有效地整合入宿主染色体上，介导目的基因稳定、长期的表达；
2> 慢病毒有更广泛的宿主范围，能够有效地感染分裂细胞、非分裂细胞，特别适合于一些难转染的细胞（如原代细胞、干细胞、不分化的细胞）和对腺病毒感染具有较强*反应的细胞（如树突状细胞、单核细胞和间充质干细胞）等；
3> 适用范围更广，不仅能用于体外实验，还能用于活体动物模型。
4> 不需要转染试剂，转导效率高，目的基因整合到宿主细胞基因组的概率大大增加；
5> 可用于研究基因的过表达、microRNA过表达和RNAi等。
6> 利用慢病毒建立稳转细胞株的时间较常规真核表达载体更短，能大大缩短实验周期、提高实验效率。
 
三、慢病毒技术整体流程
A. 慢病毒载体的构建：根据客户的不同需要，将目的基因片段连接至慢病毒载体；
B. 慢病毒包装：重组病毒质粒与包装质粒一起转染293T细胞进行包装；收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，浓缩后进行滴度测试，得到滴度≥1×108 TU/mL的慢病毒液；
C. 稳转细胞株的建立：分别使用实验组和对照组慢病毒感染细胞，利用抗生素初步筛选稳转细胞株，细胞分选得到单克隆细胞株，建立实验组和对照组的稳转细胞株。
 
慢病毒服务流程
 
                                                                      图1 慢病毒技术服务整体流程
 
四、慢病毒表达载体元件
    在慢病毒的包装系统中，慢病毒表达载体携带病毒包装和复制所需的顺式作用元件和外源基因表达盒，3个包装质粒反式提供病毒包装必需的蛋白。辉骏生物提供多种慢病毒表达载体，具体元件如下图所示，除此之外，客户还可以根据需要更换启动子、荧光基因或抗性基因。
 
                     慢病毒载体元件
                                                             图 2 慢病毒载体元件示意图
 
五、慢病毒技术服务项目
表1 慢病毒服务项目及内容
分类	服务编号	项目名称	客户提供	服务描述
RNAi慢病毒服务	FG101	RNAi慢病毒载体构建	目标基因登录号或序列	(1)设计并合成1条干扰序列
(2)构建载体
FG102A	RNAi慢病毒包装套餐A	目标基因登录号或序列	(1)设计并合成3条干扰序列(保证至少有1个靶序列的干扰效率大于70%)
(2)分别构建3条载体
(3)分别进行3次慢病毒包装
FG102B	RNAi慢病毒包装套餐B	设计好的有效靶点序列	(1)构建载体
(2)慢病毒包装
注: 可提供多条干扰序列
FG103A	RNAi稳转细胞株构建套餐A	目标基因的序列	(1)设计并合成3条干扰序列
(2)分别构建3条载体
(3)分别进行3次慢病毒包装
(4)建立稳转细胞株(得到至少1个有效干扰的细胞株)
FG103B	RNAi稳转细胞株构建套餐B	设计好的有效靶点序列	(1)构建载体
(2)慢病毒包装
(3)建立稳转细胞株
基因过表达慢病毒服务	FG111	基因过表达慢病毒载体构建	目标基因的模板	构建载体
FG112	基因过表达慢病毒包装套餐	目标基因的模板	(1)构建载体
(2)慢病毒包装
FG113	过表达稳转细胞株构建套餐	目标基因的模板	(1)构建载体
(2)慢病毒包装
(3)建立稳转细胞株
microRNA慢病毒服务	FG121	microRNA过表达载体构建	microRNA前体或初始产物模板	构建载体
FG122	microRNA过表达
慢病毒包装套餐	microRNA前体或初始产物模板	(1)构建载体
(2)慢病毒包装
FG123	microRNA过表达
稳转细胞株构建	microRNA前体或初始产物模板	(1)构建载体
(2)慢病毒包装
(3)建立稳转细胞株
 
特别提醒：
（1）基因过表达慢病毒服务适用于目标基因长度为2000bp以下的片段，2000bp以上的请具体咨询；
（2）我公司亦可进行基因钓取和WB检测服务，但费用不包含在总套餐之内，需根据实际情况收费；
（3）客户如对所需病毒量（TU）及病毒液滴度范围有特殊要求需提前告知，我公司一般提供的病毒滴度在1×108~1×109 TU/mL之间，规格为1mL；
（4）若实验材料为原代细胞和需要特殊培养的细胞，请具体咨询；
（5）客户亦可根据特殊要求进行慢病毒产品定制服务。

六、实验结果提交
实验结束后，我公司会提交完整的实验结果，包括：
1. 客户定制的相应载体、病毒液或稳转细胞株；
2. 慢病毒液滴度测定报告单；
3. 慢病毒载体的测序结果和峰图、引物序列、载体图谱；
4. 全部实验图片；
5. 详细实验报告。